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第一章 生物化学与分子生物学中的定量分析1

第一节 滴定分析法1

一、基本原理1

二、标准溶液3

三、滴定分析的计算5

四、减小滴定误差的方法6

第二节 紫外可见分光光度法7

一、基本原理7

二、分光光度计的主要部件9

三、分光光度法的定性和定量10

四、减小测定误差的方法11

第三节 荧光分析法12

一、基本原理12

二、荧光仪的主要部件13

三、荧光分析法的定性和定量13

四、减小测量误差的方法15

第四节 酶活力及动力学数据的测定15

一、酶活力的测定15

二、Km和Vmax的测定18

三、其他动力学数据的测定19

实验1-1 粗脂肪的提取和定量测定20

实验1-2 碘价的测定（Hanus法）21

实验1-3 皂化价的测定23

实验1-4 酸价的测定24

实验1-5 脂肪乙酰价的测定24

实验1-6 蛋白质的测定（凯氏定氮法）25

实验1-7 2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的含量26

实验1-8 碘量法测定维生素C的含量28

实验1-9 血糖定量测定（GOD-PAP法）29

实验1-10 蒽酮比色定糖法30

实验1-11 3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量30

实验1-12 血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法）32

实验1-13 血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）32

实验1-14 双缩脲法测定蛋白质含量33

实验1-15 Folin试剂法（Lowry法）测定蛋白质含量34

实验1-16 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量35

实验1-17 紫外吸收法测定蛋白质含量36

实验1-18 紫外吸收法测定核酸含量37

实验1-19 二苯胺显色法测定DNA含量38

实验1-20 地衣酚显色法测定RNA含量39

实验1-21 定磷法测定核酸含量40

实验1-22 荧光法测定维生素B2含量42

实验1-23 血清丙氨酸氨基移换酶（ALT）的测定43

实验1-24 酸性磷酸酯酶的测定44

实验1-25 碱性磷酸酶的反应动力学性质45

第二章 生物大分子的提取、沉淀和离心分离47

第一节 生物大分子的提取47

一、材料的选择与处理47

二、确定测定方法48

三、细胞的破碎48

四、抽提50

第二节 沉淀分离技术52

一、蛋白质的沉淀分离52

二、核酸的提取与沉淀分离55

三、多糖和小分子活性成分的提取和分离57

第三节 膜分离技术69

一、膜分离技术的分类69

二、膜的分类和性质71

三、膜的特性71

四、透析73

五、微滤、超滤和反渗透74

第四节 提取物的浓缩、结晶和干燥76

一、浓缩76

二、结晶77

三、干燥79

第五节 离心分离技术80

一、离心机的种类与用途80

二、离心分离方法的选择81

三、离心条件的确定82

四、离心操作的注意事项84

实验2-1香菇多糖的制备85

实验2-2卵磷脂的制备87

实验2-3大蒜细胞SOD的提取与分离88

实验2-4菜花（花椰菜）中核酸的分离和鉴定90

实验2-5酵母RNA的提取与分离91

实验2-6从肝脏中提取DNA92

实验2-7大肠杆菌细胞膜的分离93

实验2-8大鼠肝细胞核的分离94

第三章 层析技术95

第一节 吸附层析95

一、吸附柱层析96

二、聚酰胺薄膜层析100

第二节 分配层析100

一、概述100

二、纸层析101

第三节 凝胶层析104

一、基本原理105

二、凝胶的选择106

三、操作107

第四节 离子交换层析108

一、基本原理108

二、离子交换剂109

三、操作112

第五节 亲和层析114

一、配基与偶联凝胶的选择与处理114

二、亲和层析的操作条件116

第六节 薄层层析117

一、支持剂的选择与处理117

二、薄层板的制作118

三、层析方法118

第七节 气相色谱119

一、基本原理119

二、气相色谱的气路系统120

三、色谱柱121

四、检测器122

五、定性和定量方法123

第八节 高效液相色谱124

一、概述124

二、HPLC的特点124

三、HPLC的分类125

四、HPLC的仪器构成126

五、定性定量方法128

实验3-1 氨基酸的纸层析128

实验3-2 微晶纤维素薄板层析法分离氨基酸129

实验3-3 核苷酸的离子交换层析131

实验3-4 DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析132

实验3-5 凝胶层析测定蛋白质的Mr133

实验3-6 胰蛋白酶的亲和层析135

实验3-7 醇酯成分的气相层析136

实验3-8 HPLC法测定生物类黄酮含量138

实验3-9 HPLC法测定维生素A含量138

第四章 电泳技术140

第一节 基本原理140

一、泳动度140

二、影响泳动度的因素141

第二节 乙酸纤维素薄膜电泳142

第三节 琼脂糖凝胶电泳143

一、琼脂糖凝胶的特点143

二、DNA的琼脂糖凝胶电泳143

三、印迹转移电泳145

四、交变脉冲电场凝胶电泳145

第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳146

一、聚丙烯酰胺凝胶的特点146

二、凝胶聚合的原理及有关特性147

三、PAGE原理149

四、SDS-PAGE原理151

五、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理152

六、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳原理155

第五节 高效毛细管电泳156

一、基本原理156

二、实验方法157

三、分离类型及应用159

第六节 免疫分析技术160

一、抗体的性质和制备160

二、抗原抗体反应165

实验4-1 血清蛋白的乙酸纤维素薄膜电泳170

实验4-2 垂直板PAGE分离血清蛋白172

实验4-3 SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量173

实验4-4 等电聚焦电泳测定血清蛋白质等电点175

实验4-5 DNA的琼脂糖凝胶电泳177

实验4-6 PAGE分离RNA178

实验4-7 对流免疫电泳法测定胎儿甲种球蛋白179

实验4-8 火箭免疫电泳法测定抗原含量181

第五章 分子生物学基本技术182

第一节 DNA的体外合成182

一、DNA的化学合成182

二、聚合酶链反应技术183

第二节 核酸的分子杂交188

一、探针的种类与选择188

二、标记物的选择189

三、探针的放射性同位素标记193

四、探针的非放射性标记193

五、膜上印迹杂交的条件选择194

六、杂交信号的检测197

七、DNA芯片技术及应用198

第三节 基因克隆199

一、目的基因的来源199

二、常用的克隆载体200

三、DNA分子的体外连接202

四、重组子导入受体细胞204

五、重组子的筛选204

六、基因组文库的构建206

七、cDNA文库的构建208

第四节 基因表达210

一、原核生物的表达载体210

二、用于原核细胞表达的外源基因212

三、提高表达水平的措施212

四、外源基因在酵母细胞中的表达216

五、外源基因在昆虫杆状病毒中的表达217

六、外源基因在哺乳动物细胞中的表达219

第五节 转基因植物和转基因动物222

一、转基因植物222

二、转基因动物224

第六节 基因组学的研究方法226

一、核酸的序列测定227

二、结构基因组学231

三、功能基因组学236

第七节 转录调控研究技术242

一、基因功能状态的研究方法242

二、顺式作用元件与反式作用因子的分析方法244

实验5-1 植物基因组DNA的提取246

实验5-2 动物基因组DNA的提取249

实验5-3 细菌基因组DNA的提取250

实验5-4 质粒DNA的提取251

实验5-5 大肠杆菌的转化253

实验5-6 质粒DNA的酶切及电泳鉴定254

实验5-7 质粒DNA的分子杂交255

实验5-8 使用光敏生物素探针的Southern杂交258

实验5-9 DNA重组259

实验5-10 聚合酶链式反应（PCR）260

实验5-11 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达261

第六章 综合性实验和设计性实验263

实验6-1 溶菌酶的分离纯化264

实验6-2 超氧化物歧化酶的分离纯化和同工酶分析268

实验6-3 利用PCR差异显示mRNA272

实验6-4 cDNA文库的构建276

实验6-5 蛋白质印迹分析283

实验6-6 蛋白质的双向凝胶电泳286

附录一 实验数据的处理288

附录二 调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）295

附录三 换算转速、相对离心力和转子半径的列线图296

附录四 常见生化物质电泳后的染色方法297

附录五 常用缓冲液的配制300

参考书目306