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学习情境1动物细胞培养的准备工作1

任务一 动物细胞培养常用设备和器材的使用与保养1

认知与解读1

一、动物细胞培养实验室的设置1

二、动物细胞培养常用设备2

三、动物细胞培养常用器材4

操作与体验6

技能一 动物细胞培养常用设备的使用与维护6

技能二 动物细胞培养常用器材的使用与维护16

检查与评价20

一、检查20

二、评价21

分析与思考24

拓展与链接24

一、动物细胞培养的发展简史24

二、动物细胞培养的概念26

任务二 动物细胞培养用品的清洗、包装和灭菌27

认知与解读27

一、培养用品的清洗27

二、培养用品的包装30

三、培养用品的消毒灭菌31

操作与体验32

技能一 清洗液的配制32

技能二 动物细胞培养用品的清洗、包装和灭菌33

检查与评价38

一、检查38

二、评价39

分析与思考41

拓展与链接42

一、细胞培养的优缺点42

二、细胞培养的基本要求43

任务三 动物细胞培养液及培养用液的配制44

认知与解读44

一、平衡盐溶液44

二、天然培养基44

三、合成培养基45

四、细胞消化液47

五、pH调整液47

六、抗生素溶液48

七、无血清培养基48

操作与体验48

技能一 常用BSS液的配制48

技能二 常用细胞消化液的配制50

技能三 常用pH调整液的配制51

技能四 常用抗生素溶液的配制52

技能五 常用天然培养基的制备53

技能六 常用合成培养基的配制56

检查与 评价58

一、检查58

二、评价59

分析与思考61

拓展与链接61

一、动物细胞体外培养的营养条件61

二、动物细胞体外培养的环境条件63

学习情境2动物细胞培养65

任务一 动物细胞的取材与分离65

认知与解读65

一、原代细胞的取材65

二、原代细胞的分离66

操作与体验68

技能一 机械分散法分离原代细胞68

技能二 消化法分离原代细胞69

技能三 细胞计数及活力测定70

检查与评价72

一、检查72

二、评价72

分析与思考74

拓展与链接75

一、培养操作基本要领和要求75

二、其他组织的取材77

任务二 动物细胞的原代培养78

认知与解读78

一、组织培养法78

二、消化培养法79

操作与体验80

技能一 鸡胚成纤维细胞原代培养——组织培养法80

技能二 鸡胚成纤维细胞原代培养——消化培养法82

检查与评价84

一、检查84

二、评价84

分析与思考86

拓展与链接87

一、小鼠胎儿细胞的原代培养87

二、其他细胞的培养89

任务三 动物细胞的传代培养94

认知与解读94

一、原代培养的首次传代94

二、细胞传代方法95

三、培养细胞的纯化96

四、培养细胞的克隆化96

操作与体验97

技能一 鸡胚成纤维细胞的传代培养97

技能二 培养细胞的纯化99

技能三 培养细胞的克隆化100

检查与评价103

一、检查103

二、评价104

分析与思考105

拓展与链接106

一、传代细胞的建系和维持106

二、培养细胞的其他纯化方法107

任务四动物细胞的常规检查108

认知与解读108

一、培养细胞常规检查内容和方法108

二、培养细胞的污染109

操作与体验111

技能一 细胞生长曲线的测定111

技能二 检查培养细胞的常用手段112

技能三 培养细胞的常规检查115

技能四细胞活性检查118

检查与评价119

一、检查119

二、评价120

分析与思考122

拓展与链接123

一、培养细胞的生长类型和形态特征123

二、培养细胞的生长特点125

三、培养细胞的生长和增殖过程127

学习情境3动物细胞的冷冻和复苏130

任务一 动物细胞的冻存130

认知与解读130

一、细胞的冻存和复苏130

二、细胞的运输133

操作与体验133

技能一 培养细胞的冻存133

技能二 特殊培养细胞的冻存135

检查与评价136

一、检查136

二、评价136

分析与思考139

拓展与链接140

一、培养细胞冷冻保存概述140

二、冷冻保存方法141

任务二 动物冻存细胞的复苏142

认知与解读142

一、细胞复苏基本知识142

二、细胞的常规复苏法142

三、杂交瘤的复苏142

操作与体验142

技能一 冻存细胞的常规复苏技术142

技能二 杂交瘤细胞的复苏技术144

检查与评价146

一、检查146

二、评价146

分析与思考149

拓展与链接150

一、细胞冻存的发展历史150

二、细胞冻存的应用150

三、细胞的运输151

学习情境4病毒的细胞培养与鉴定153

任务一 病毒的细胞培养153

认知与解读153

一、细胞培养用于病毒研究的优点153

二、用细胞培养技术分离病毒154

三、用细胞培养病毒基本条件155

四、用细胞培养病毒时的注意事项156

操作与体验156

技能一 MDCK细胞分离流感病毒156

技能二 人胚肾细胞分离脊髓灰质炎病毒158

技能三 侵染病毒（病变）细胞的观察与判断159

检查与评价161

一、检查161

二、评价162

分析与思考163

拓展与链接164

一、病毒细胞培养的发展简史164

二、病毒概述164

任务二 病毒的鉴定技术169

认知与解读169

一、病毒蚀斑技术169

二、病毒蚀斑抑制试验171

三、细胞培养系统中的中和试验171

四、用细胞培养法制备病毒血清学抗原应注意的问题172

操作与体验172

技能一 病毒的蚀斑鉴定技术172

技能二 病毒蚀斑抑制试验175

技能三 病毒的中和试验鉴定技术176

检查与评价178

一、检查178

二、评价178

分析与思考180

拓展与链接181

一、病毒毒价的测定181

二、病毒毒价的测定（微量法）182

学习情境5 单克隆抗体制备184

任务一 动物免疫184

认知与解读184

一、抗原制备184

二、免疫动物的选择184

三、免疫程序的确定184

四、抗体检测185

操作与体验185

技能一 小鼠捕捉、注射与采血技术185

技能二 动物免疫技术188

技能三 免疫小鼠血清效价测定技术190

检查与评价193

一、检查193

二、评价193

分析与思考196

拓展与链接197

一、单克隆抗体的概念197

二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理198

三、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要过程198

四、各种免疫方法的比较198

任务二 细胞融合及杂交瘤细胞的筛选199

认知与解读199

一、骨髓瘤细胞199

二、饲养细胞200

三、脾细胞200

四、细胞融合201

五、杂交瘤细胞的培养、观察与筛选201

操作与体验203

技能一 细胞融合主要试剂的配制203

技能二 骨髓瘤细胞悬液的制备205

技能三 饲养细胞的制备205

技能四 免疫脾细胞悬液的制备207

技能五 细胞融合208

技能六 融合后混合细胞的培养及杂交瘤细胞的筛选与观察210

检查与评价212

一、检查212

二、评价212

分析与思考214

拓展与链接215

一、细胞融合215

二、融合细胞的早期观察及其异常结果分析219

任务三 单克隆抗体的筛选与检测220

认知与解读220

一、概述220

二、酶联免疫技术（ELISA）221

操作与体验224

技能一 可溶性抗原的ELISA间接法筛选杂交瘤阳性克隆224

检查与评价226

一、检查226

二、评价226

分析与思考229

拓展与链接229

其他常用的抗体检测方法229

任务四杂交瘤细胞克隆化233

认知与解读233

一、杂交瘤克隆化概述233

二、杂交瘤克隆化的方法234

操作与体验235

技能一 有限稀释法克隆化杂交瘤细胞235

技能二 软琼脂法克隆化杂交瘤细胞236

检查与评价237

一、检查237

二、评价238

分析与思考239

拓展与链接240

杂交瘤细胞的冻存与复苏（详参情境三）240

任务五单克隆抗体的大量制备与鉴定241

认知与解读241

一、单克隆抗体的大规模制备241

二、单克隆抗体的纯化243

三、单抗特性的鉴定244

操作与体验245

技能一 动物体内大量生产单克隆抗体245

技能二 单克隆抗体的初步纯化246

技能三 单克隆抗体的鉴定248

检查与评价250

一、检查250

二、评价251

分析与思考253

拓展与链接254

一、单抗的标记254

二、单克隆抗体生产的影响因素、失败原因分析257

附录259

附录一 259

附录二 260

附录三 261

附录四262

参考文献263