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第一篇 植物生理生化实验原理3

第一章 植物生理生化实验技术的基本原理3

1.1 植物材料的种类3

1.2 植物材料的采取3

1.3 分析样品的前处理和保存4

1.4 待测组分的提取、分离和纯化技术5

1.5 样品中待测组分的测定7

1.6 实验结果的数据处理与分析8

第二章 离心技术11

2.1 基本原理11

2.2 离心机的类型及主要构造13

2.3 常用的离心技术14

2.4 分析性超速离心技术的应用16

第三章 层析技术18

3.1 层析原理18

3.2 分配层析20

3.3 吸附层析21

3.4 凝胶层析23

3.5 离子交换层析24

3.6 亲和层析25

3.7 气相色谱26

3.8 高压液相色谱28

3.9 毛细管电泳色谱29

3.10 层析技术的应用29

第四章 电泳技术32

4.1 电泳基本原理32

4.2 影响迁移率的主要因素33

4.3 凝胶电泳35

4.4 电泳的应用46

第五章 红外线CO1气体分析技术48

5.1 红外线CO1气体分析仪的工作原理48

5.2 红外线CO1气体分析仪的类型51

5.3 红外线CO2气体分析技术的运用56

第六章 光学分析技术58

6.1 紫外光-可见光分光光度法58

6.2 原子吸收分光光度法66

6.3 火焰分光光度法70

6.4 荧光分光光度法72

6.5 旋光分析法75

6.6 近红外分析法78

第七章 气体测压技术81

7.1 气体测压技术的类型及其基本原理81

7.2 气体测压技术的应用83

第八章 电化学分析技术87

8.1 电化学分析技术的类型及其基本原理87

8.2 电化学分析技术的应用89

8.3 DDS-12A型数字式电导率仪的基本原理及使用方法89

第九章 免疫化学技术——酶联免疫吸附测定法（ELISA）91

9.1 ELISA的原理91

9.2 设计和合成特定的免疫原92

9.3 抗体的制备92

9.4 标记抗原的制备93

9.5 ELISA测定程序的设计93

第十章 Southern blotting和PCR反应原理与技术95

10.1 Southern杂交95

10.2 PCR反应98

第二篇 植物生理生化实验技术103

实验1 植物组织中自由水和束缚水含量的测定103

实验2 植物组织水势的测定108

Ⅰ 小液流法108

Ⅱ 折光仪法109

Ⅲ 露点法109

实验3 钾离子对气孔开度的影响114

实验4 植物的溶液培养和缺素观察115

实验5 植物体内硝态氮含量的测定118

实验6 植物伤流液中糖和氨基酸的测定120

实验7 根系活力的测定——TTC法123

实验8 植物体内硝酸还原酶活力的测定125

Ⅰ 离体法125

Ⅱ 活体法127

实验9 植物谷氨酰胺合成酶活性的测定129

实验10 叶绿体色素含量的测定131

实验11 希尔反应的观察134

实验12 离体叶绿体光诱导荧光强度的测定135

实验13 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶活性的测定137

Ⅰ 分光光度法137

Ⅱ 同位素法139

实验14 叶绿体中3-磷酸甘油醛脱氢酶活性的测定141

实验15 乙醇酸氧化酶活性的测定144

实验16 真空渗入法测定环境因子对植物光合作用的影响146

实验17 红外线CO1气体分析仪法测定植物光合速率与呼吸速率148

Ⅰ CB-1101光合测定仪测定光合速率148

Ⅱ TPS-1便携式光合作用系统测定光合速率、呼吸速率和蒸腾速率151

实验18 氧电极法测定光合速率和呼吸速率154

实验19 微量定容测压法测定种子的呼吸速率158

实验20 小篮子法（广口瓶法）测定植物呼吸速率161

实验21 植物组织中总氮含量的测定——微量凯氏定氮法163

实验22 植物组织中游离氨基酸总量的测定——茚三酮溶液显色法168

实验23 植物组织中可溶性糖含量的测定171

Ⅰ 蒽酮比色法测定可溶性糖171

Ⅱ 3,5-二硝基水杨酸测定还原糖173

Ⅲ 苯酚法测定可溶性糖174

Ⅳ 斐林试剂比色法测定还原糖176

实验24 植物组织中蛋白质含量的测定178

Ⅰ 双缩脲法178

Ⅱ Folin-酚试剂法180

Ⅲ 考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）182

Ⅳ 紫外吸收法184

实验25 植物组织中有机酸含量测定187

实验26 淀粉酶活性的测定189

实验27 叶绿体ATP酶活性测定192

实验28 脲酶Km值的测定195

实验29 蛋白质相对分子质量的测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法198

实验30 植物过氧化物酶同工酶测定——圆盘式凝胶电泳法201

实验31 植物组织中DNA的提取与测定204

实验32 DNA的琼脂糖凝胶电泳207

实验33 RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳209

实验34 PCR反应211

实验35 Southern blotting213

实验36 植物细胞G蛋白活性的测定216

Ⅰ 荧光法216

Ⅱ 同位素放射强度法218

实验37 酶联免疫法（ELISA）测定CaM总量220

实验38 蛋白质磷酸化酶——钙依赖蛋白激酶活性的测定223

Ⅰ 液闪法223

Ⅱ 放射自显影法225

实验39 生长素类调节剂对种子萌发的影响227

实验40 赤霉素对α-淀粉酶的诱导形成229

实验41 植物激素对愈伤组织的形成和分化的影响231

实验42 高效液相色谱法测定植物的内源激素含量234

实验43 气相色谱法测定乙烯含量237

实验44 酶联免疫吸附检测法（ELISA）测定植物激素含量239

实验45 植物春化和光周期现象的观察242

Ⅰ 植物春化现象的观察242

Ⅱ 植物光周期现象的观察243

实验46 花粉活力的测定244

Ⅰ 碘-碘化钾（I2-KI）染色法244

Ⅱ 过氧化物酶测定法244

Ⅲ 氯化三苯基四氮唑（TTC）法245

实验47 植物种子生命力的快速测定247

Ⅰ TTC法247

Ⅱ 染料染色法248

Ⅲ 碘化钾反应法249

Ⅳ 荧光法249

实验48 谷物淀粉含量的测定（旋光法）251

方法Ⅰ251

方法Ⅱ253

实验49 谷物种子蛋白质组分的分析255

实验50 谷类作物种子中赖氨酸含量的测定——茚三酮比色法257

实验51 种子粗脂肪含量的测定259

实验52 植物组织中纤维素含量的测定261

实验53 植物种子中主要不饱和脂肪酸的分离——反相纸层析法263

实验54 油菜籽中硫代葡糖苷总量的测定265

Ⅰ 内源酶法265

Ⅱ 葡萄糖试纸法266

实验55 抗坏血酸（维生素C）含量的测定268

Ⅰ 滴定法268

Ⅱ 比色法270

实验56 果蔬可溶性固形物含量的测定272

实验57 游离脯氨酸含量的测定274

实验58 植物组织中丙二醛含量的测定276

实验59 气相色谱法测定植物样品膜脂中脂肪酸的含量278

实验60 植物抗逆生理指标的测定——电导仪法280

实验61 愈创木酚法测定过氧化物酶活性282

实验62 高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶活性284

实验63 氮蓝四唑（NBT）法测定超氧物歧化酶活力286

实验64 苯丙氨酸解氨酶活性的测定288

实验65 综合实验1——以大豆为材料290

实验66 综合实验2——以甜叶菊叶片为材料291

实验67 综合性实验3——低温胁迫对植物幼苗的影响292

实验68 综合性实验4——CaCl2在增强植物抗旱性中的作用293

实验69 综合性实验5——果蔬的品质分析294

附录295

附录1 硫酸铵饱和度常用表295

附录2 实验中常用酸碱的相对密度和浓度的关系297

附录3 常用固态酸、碱、盐的配制参考表297

附录4 常用酸碱指示剂298

附录5 常用缓冲溶液的配制298

附录6 Hoagland营养液及改良Hoagland营养液配方302

附录7 植物组织培养常用培养基303

附录8 常见的植物生长调节物质及其主要性质304

附录9 植物激素与生长调节剂在农业生产中的应用305

参考文献307