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目录1

第一篇 植物基因工程——分子水平的植物生物技术1

1 植物基因工程的策略5

1.1 植物基因克隆策略5

1.2 植物基因表达策略13

2 植物基因克隆技术要素13

2.1 植物基因克隆载体20

2.2 植物基因克隆的工具酶34

2.3 凝胶电泳技术43

2.4 杂交探针制备与放射自显影术50

2.5 工程细菌的培养、纯化与保藏技术55

3 植物基因文库的构建与cDNA克隆60

3.1 基因文库的构建60

3.2 cDNA克隆的制备66

3.3 重组DNA分子导入宿主细胞77

3.4 重组体的鉴定与克隆基因检测83

4 植物来源的基因和各种有用的异源基因95

4.1 植物基因组概况95

4.2 植物来源的克隆基因116

4.3 各种来源的有用基因136

5 植物基因工程载体142

5.1 根癌农杆菌与植物的相互关系142

5.2 Ti质粒的改造与载体构建156

5.3 常用的植物基因工程载体简介168

5.4 潜在植物基因工程载体177

6 植物受体细胞系统与基因转化185

6.1 植物受体细胞系统概述185

6.2 根癌农杆菌介导的基因转化190

6.3 DNA直接导入和媒体介导的基因转化201

6.4 病毒介导的基因转化218

7 外源基因在植物转化细胞中的表达与转基因植物的鉴定229

7.1 外源基因在植物细胞中的表达229

7.2 启动子与外源基因表达231

7.3 转化细胞和转基因植物的鉴定245

第二篇 植物细胞工程——细胞及亚细胞水平的植物生物技术245

8 植物的突变细胞系及其利用245

8.1 植物突变细胞系的概念及类型256

8.2 突变细胞系的实验和选择步骤267

8.3 农业上有应用潜力的突变系的选择和利用276

9 植物细胞大量培养及次生代谢物的生产276

9.1 利用植物大量培养细胞生产次生代谢物的意义285

9.2 产生次生代谢物的植物细胞的特征288

9.3 应用植物培养细胞生产次生代谢物的要素291

10.1 原生质体融合与体细胞杂种的意义及原理302

10 原生质体融合与体细胞杂种302

10.2 杂种细胞的确定和选择305

10.3 杂种细胞的发展动态308

10.4 体细胞杂种植株形成的原理309

10.5 原生质体融合实验的方法和步骤311

10.6 体细胞杂交及杂种植物的遗传和利用313

10.7 体细胞杂种植株事例316

10.8 亚细胞水平的遗传操作320

第三篇 其他的植物生物技术320

11 植物细胞组织培养技术与植物生物技术320

11.1 花药培养326

11.2 子房培养和孤雌生殖333

11.3 离体胚培养、胚珠培养和胚乳培养334

11.4 试管授粉和受精技术339

12 快速无性繁殖、人工种子的研制及种质保藏339

12.1 植物的快速繁殖技术345

12.2 人工种子的研制356

12.3 应用生物技术储藏种质的方法362

第四篇 技术与方法368

实验一 Ti质粒的制备与鉴定368

附Ⅰ Ti质粒DNA的微量制备371

附Ⅱ Eckhardt凝胶分析372

实验二 中介载体的构建373

附Ⅰ 琼脂糖凝胶中DNA的洗脱378

附Ⅱ Ecoli（K514r-m+）的转化379

附Ⅲ 重组DNA克隆的快速检测380

实验三 突变型Ti质粒结构的鉴定381

附Ⅰ 用缺口转译法制备探针384

附Ⅱ 从根癌农杆菌单菌落制备Southern印迹杂交用DNA385

实验四 广谱中介载体导入根癌农杆菌386

实验五 在Ti质粒中引入抗生素抗性标记基因389

实验六 通过pBR322衍生载体的直接动员将非选择性DNA导入T区段390

实验七 共整合载体与双元载体的比较392

附Ⅰ 用质粒DNA直接转化根癌农杆菌398

实验八 含Tn5衍生质粒的工程菌的构建398

实验九 冠瘿瘤与发状根的诱发402

实验十 冠瘘瘤与发状根的离体培养及植株再生405

实验十一 共培养法407

实验十二 叶盘法409

实验十三 活体接种与共感染法411

实验十四 直接基因转移法——PEG诱导法413

实验十五 电激法415

附Ⅰ 电场强度和脉冲频度对DNA吸收的影响417

实验十六 圆球体法420

实验十七 脂质体法422

实验十八 显微注射法424

实验十九 植物转化组织中冠瘿碱的检测426

附Ⅰ 用坂口试剂检测胭脂碱和章鱼碱431

实验二十 NPTII、CAT与DHFR的检测432

实验廿一 T-DNA在植物细胞中的转录及其与cDNA探针的杂交437

附Ⅰ 植物总RNA的制备441

附Ⅱ 植物poly(A)+RNA的制备442

实验廿二 植物培养细胞中核的分离与分离核的转录443

实验廿三 转基因植物中外源基因转录的“开关”鉴定及杂交验证446

实验廿四 病毒RNA转染原生质体的免疫学检测法452

附Ⅰ 简易抗体染色法454

实验廿五 用Southern印迹杂交检测病毒DNA复制455

附Ⅰ Sonthern印迹杂交用植物DNA的微量制备457

附Ⅱ 植物大片段DNA的分离458

实验廿六 在叶绿体中导入核编码蛋白质460

附Ⅰ 植物叶绿体和线粒体DNA的分离464

实验廿七 原生质体融合与核质杂种及胞质杂种的选择466

实验廿八 融合产物的鉴定与体细胞杂种469

实验廿九 体细胞杂种与胞质杂种的鉴定470

实验三十 植物原生质体的电融合473

实验卅一 植物突变体的分离与鉴定474

实验卅二 植物组织细胞的冷冻保藏476

实验卅三 植物组织的去病毒培养478

实验卅四 高产次生代谢物细胞系的选择480

实验卅五 悬浮细胞的同步化培养480

附录 （APPENDEX）484

1．植物基本培养基484

2．遗传密码和氨基酸代号485

3．典型基因的结构和有关术语486

4．大肠杆菌遗传学命名规则487

缩略词（ABBREVIATION）489