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目录1

1　细胞学技术1

1.1　显微镜1

1.1.1　光学显微镜1

1.1.1.1　普通光学显微镜1

1.1.1.2　相差显微镜7

1.1.1.3　暗视野显微镜10

1.1.1.4　荧光显微镜12

1.1.1.5　倒置显微镜15

1.1.1.6　体视显微镜15

1.1.2.1　电镜的基本原理16

1.1.2　电子显微镜16

1.1.1.7　万能研究用显微镜16

1.1.2.2　电镜的基本构造17

1.1.2.3　透射电镜的标本制备及观察17

1.1.2.4　扫描电镜的标本制备及观察19

1.1.2.5　其他电镜20

1.1.2.6　电镜的制备技术20

1.1.2.7　电子探针显微镜分析21

1.1.3　显微镜的应用22

1.1.3.1　细胞显微摄影22

1.1.3.2　血液涂片及显微测量28

1.1.3.3　细胞显微注射30

1.2.1.1　光学显微镜下的细胞形态和结构34

1.2.1　细胞的形态结构34

1.1.3.4　放射自显影术34

1.2　细胞结构观察和成分分析34

1.2.1.2　细胞器的显微和超微结构35

1.2.1.3　细胞中微丝的染色及观察37

1.2.1.4　细胞组分的分级分离39

1.2.1.5　细胞群体中各周期时相百分比的测定42

1.2.2　细胞化学分析43

1.2.2.1　细胞内蛋白质及核酸成分的测定43

1.2.2.2　细胞内酸性磷酸酶和过氧化物酶的测定45

1.2.3　细胞的生命活动48

1.2.3.1　观察细胞的生理活动48

1.2.3.2　人类ABO血型的测定49

1.2.3.3　细胞的活体染色50

1.2.3.4　同种和异种细胞融合53

1.2.3.5　动物细胞的原代培养和细胞计数55

1.2.3.6　动物和植物细胞的有丝分裂58

1.2.3.7　动物细胞的减数分裂60

1.2.3.8 TUNEL法检测细胞凋亡62

参考文献69

2　免疫学检测技术70

2.1　细胞免疫检测技术70

2.1.1　人外周血单个核细胞分离——Ficoll分层离心法70

2.1.2 　T、B淋巴细胞的分离——尼龙毛柱法72

2.1.3　小鼠腹腔巨噬细胞分离73

2.1.5 E玫瑰花环试验74

2.1.4 T淋巴细胞亚群检测——微量细胞毒法74

2.1.6 B细胞膜免疫球蛋白检测75

2.1.7 脾细胞介导的SRBC溶血分光光度计定量测定法（QHS）76

2.1.8　小鼠骨髓细胞自发增殖活性测定76

2.1.9　小鼠胸腺细胞自发增殖活性测定77

2.1.10　小鼠脾细胞自发增殖活性测定78

2.1.11 　T淋巴细胞转化试验78

2.1.11.1 3H-TdR掺入法78

2.1.11.2 MTT比色法79

2.1.11.3 微量全血法79

2.1.13.1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞80

2.1.12 B淋巴细胞转化试验80

2.1.13 巨噬细胞吞噬功能测定80

2.1.13.2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红测定81

2.1.14 细胞介导的细胞毒技术82

2.1.14.1 抗体依赖性细胞介导细胞毒试验82

2.1.14.2 NK细胞介导的细胞毒试验83

2.1.14.3 补体依赖性细胞毒实验——小鼠脾及胸腺T细胞百分率测定86

2.1.14.4 小鼠细胞毒T细胞（CTL）活性测定87

2.1.15 LAK杀伤活性检测88

2.2 细胞因子检测技术89

2.2.1 白细胞介素1的诱生及检测91

2.2.2.1 依赖细胞株增殖测定法92

2.2.2 白细胞介素2检测92

2.2.2.2 鼠脾T淋巴细胞增殖分析法93

2.2.3 肿瘤坏死因子测定94

2.2.4 集落刺激因子检测95

2.2.5 干扰素检测96

2.2.6 趋化因子检测98

2.2.7 血管内皮细胞生长因子检测99

2.2.8 转化生长因子β检测99

2.3 抗体制备技术100

2.3.1 免疫血清制备100

2.3.2 动物的选择100

2.3.4 佐剂101

2.3.3 免疫原101

2.3.5 免疫途径102

2.3.6 免疫血清效价的测定102

2.3.7 采血及分离血清102

2.3.8 免疫血清的保存103

2.3.9 兔抗人血清白蛋白多克隆抗体的制备103

2.3.10 抗体的纯化104

2.3.10.1 硫酸铵盐析法104

2.3.10.2 DEAE-纤维素层析法105

2.3.11 单克隆抗体制备106

2.3.12 基因工程抗体109

2.4.1.1 玻片凝集——ABO血型鉴定110

2.4.1 直接凝集110

2.4 抗原抗体检测技术110

2.4.1.2 试管凝集111

2.4.2 间接凝集—抗链球菌溶血素O（ASO）抗体的检测114

2.4.3 协同凝集115

2.4.4 双向免疫扩散116

2.4.5 单向免疫扩散118

2.4.6 对流免疫电泳119

2.4.7 火箭电泳121

2.4.8 免疫电泳122

2.4.9 免疫印记检测嗜酸性粒细胞白血病细胞（Eol-1）bcl-2蛋白的表达123

2.4.10 免疫沉淀法128

2.4.11 补体依赖细胞毒试验130

2.4.12 溶血反应——血清总补体含量的测定（CH50）131

2.5　免疫标记技术133

2.5.1　免疫荧光技术133

2.5.1.1　间接法——T细胞亚群检测133

2.5.2　免疫酶技术135

2.5.2.1　夹心法ELISA——检测sIL-2R135

2.5.2.2　 ELISA间接法——单抗隆抗体筛选136

2.5.2.3　免疫酶染色——IL-2受体阳性细胞检测137

2.6　放射免疫分析138

2.6.1　放射性同位素标记抗原138

2.6.2　放射免疫分析技术139

2.7　免疫组织化学技术141

2.6.3　免疫放射测定141

2.7.1.1　免疫酶组织化学技术143

2.7.1　常用的免疫组化技术143

2.7.1.2　胶质细胞酸性蛋白（GFAP）的免疫组化染色分析145

2.7.2　免疫荧光组化技术146

2.7.2.1　直接法146

2.7.2.2　间接法147

2.7.2.3　补体法147

2.7.2.4　双重免疫荧光染色法147

2.7.3　亲合组织化学技术148

2.7.3.1 生物素—抗生物素免疫细胞组织化学染色技术148

2.7.3.3　凝集素法149

2.7.3.2　葡萄球菌A蛋白（SPA）法149

2.7.4　免疫金银细胞组织化学技术150

2.7.4.1　免疫金法（IGS）150

2.7.4.2　免疫银法（IGSS）150

2.7.5　免疫胶体铁细胞组织化学技术151

2.8　超敏反应检测技术151

2.8.1　血清总IgE测定151

2.8.1.1　反向间接血凝法测定人血清总IgE151

2.8.1.2 ELISA双抗体夹心法测定人血清总IgE152

2.8.2 特异性IgE的测定154

2.8.3 过敏性皮肤试验155

2.8.4.1 聚乙二醇沉淀试验156

2.8.4 免疫复合物测定156

2.8.4.2 125I标记的Clq结合试验157

2.8.5 Ⅳ型超敏反应皮肤试验158

2.8.5.1 结核菌素试验158

2.8.5.2 链激酶-链导酶（SK-SD）皮肤试验159

参考文献160

3 医学遗传学技术161

3.1 细胞遗传学实验技术161

3.1.1 人的X染色质和鼓槌161

3.1.2 人类的染色体及核仁形成区162

3.1.3 人类的染色体核型164

3.1.4 小白鼠骨髓细胞的染色体165

3.1.5 人类外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备技术166

3.1.6 人类染色体G显带技术及染色体G显带的鉴别168

3.1.7 人类染色体C显带技术169

3.1.8 人类高分辨显带染色体标本的制备技术169

3.1.9 实体瘤细胞染色体标本的制备技术171

3.1.10 羊水细胞的培养及其染色体标本的制备技术172

3.1.11 绒毛细胞的培养及其染色体标本的制备技术175

3.1.12 X,Y性染色质的检查177

3.1.13 X染色体脆性部位显示法178

3.2 遗传毒理学实验技术178

3.2.1 姐妹染色单体互换试验179

3.2.1.1 小鼠骨髓细胞姐妹染色单体互换试验180

3.2.1.2 人外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换试验181

3.2.2 染色体畸变试验183

3.2.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验187

3.2.4 人外周血淋巴细胞微核试验189

3.2.5 精子畸形试验190

3.2.6 非程序DNA合成192

参考文献194

4 分子生物学技术195

4.1 基因诊断技术195

4.1.1 慢性粒细胞白血病的基因易位与基因诊断198

4.1.1.1 基因组DNA的提取199

4.1.1.2 DNA样品的纯化、定量和浓缩202

4.1.1.3 人染色体DNA的限制性酶切203

4.1.1.4 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段204

4.1.1.5 Southern印记转移DNA片段206

4.1.1.6 分子杂交和放射自显影207

4.1.2 用PCR扩增法检测性别211

4.1.2.1 微量外周血标本制备模板DNA212

4.1.2.2 PCR检测性别212

4.1.3 PCR-SSCP诊断法214

4.1.4 基因诊断的实验设计216

4.2 免疫分子生物学检测技术217

4.2.1 免疫PCR检测thIL-3217

4.2.2 TNFa mRNA表达的测定218

4.3.1 提取组织DNA220

4.3 HPV基因的克隆及初步鉴定220

4.3.2 核酸定量221

4.3.3 PCR扩增221

4.3.4 PCB产物回收221

4.3.5 连接反应221

4.3.6 转化222

4.3.7 阳性重组体筛选及初步鉴定222

参考文献222

5 细菌分析技术224

5.1 细菌染色技术224

5.1.1细菌的革兰染色法224

5.1.2 细菌荚膜染色法（Hiss法）225

5.1.3 细菌鞭毛染色法226

5.1.4 细菌芽胞染色法226

5.1.5 抗酸染色法227

5.1.6 奈瑟染色法227

5.2 细菌的分离培养228

5.2.1 常用培养基的制备228

5.3 细菌培养技术和生长现象示教230

5.3.1 平板划线分离培养法230

5.3.2 纯种细菌移种技术232

5.3.2.1 斜面培养基移种技术232

5.3.2.2 液体培养基移种技术232

技术233

5.3.2.3 半固体培养基移种233

5.3.3 细菌在各种培养基上生长现象的观察234

5.4 细菌基本形态和特殊结构235

5.5 细菌运动的观察236

5.6 细菌的变异现象236

5.6.1 H-0变异236

5.6.2 细菌的L型变异237

5.6.3 细菌的耐药性基因突变238

5.6.4 S-R变异238

5.7 人体正常菌群的检测239

5.7.1 手指皮肤的细菌检查239

5.7.2 口腔中细菌的检查239

5.8.1 噬菌体的分离及其对细菌的裂解试验240

5.8 细菌遗传学试验240

5.8.2 细菌质粒的提取、酶切与连接实验241

5.8.3 接合试验244

5.8.4 转化试验244

5.8.5 鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变试验（Ame’s test）245

5.9 抗生素抑菌试验与细菌耐药试验246

5.9.1 抗生素体外抑菌作用试验246

5.9.1.1 纸条法246

5.9.1.2 最小抑菌浓度（MIC）及最小杀菌浓度（MBC）测定248

5.9.2 抗生素体内抑菌试验（ED50测定）248

5.9.3 细菌或细菌毒素半数致死量（LD50）测定248

5.10.1 葡萄球菌属249

5.10 细菌的微生物学检查249

5.10.2 链球菌属251

5.10.2.1 化脓性链球菌251

5.10.2.2 肺炎链球菌252

5.10.2.3 脓汁中病原菌的分离与鉴定254

5.10.3 奈瑟菌属255

5.10.4 肠道杆菌257

5.10.5 霍乱弧菌261

5.10.6 厌氧性细菌265

5.10.7 棒状杆菌268

5.10.8 分枝杆菌属270

5.10.9.1 侵入性检查275

5.10.9 幽门螺杆菌275

5.10.9.2 非侵入性检查277

5.10.10 其他细菌278

5.10.10.1 布鲁斯菌278

5.10.10.2 芽胞杆菌278

5.10.10.3 鼠疫耶尔森菌278

5.10.10.4 铜绿假单胞菌278

5.10.10.5 流感嗜血杆菌279

5.10.10.6 军团菌279

5.10.10.7 百日咳鲍特菌279

5.10.11 自动细菌鉴定系统280

参考文献281

6.1.2 肺炎支原体冷凝集试验282

6.1.1 肺炎支原体“油煎蛋”样菌落示教282

6 其他原核微生物的微生物学检查282

6.1 肺炎支原体282

6.2 衣原体283

6.2.1 沙眼——包涵体结膜炎包涵体的检查283

6.2.2 沙眼衣原体的分离培养284

6.3 立克次体284

6.3.1 立克次体形态及染色性示教284

6.4 螺旋体284

6.4.1 钩端螺旋体形态及染色性示教284

6.4.2 钩端螺旋体暗视野显微镜检查法284

6.4.3 钩端螺旋体的分离与鉴定285

6.4.4 钩端螺旋体凝集溶解试验286

6.4.5　梅毒螺旋体的形态学检查287

6.4.6　梅毒螺旋体动物接种试验287

6.4.7　诊断梅毒的血清学试验287

6.4.8　回归热螺旋体形态示教289

6.5　放线菌289

6.5.1　放线菌“硫磺颗粒”示教289

参考文献291

7　真菌学292

7.1　真菌的形态结构及主要病原真菌的形态示教292

7.2　真菌的培养物示教294

7.3　真菌的分离培养295

7.4　皮肤癣菌的临床标本检查296

7.5 白色念珠菌的形态示教296

7.6 白色念珠菌的分离与鉴定297

7.7　新型隐球菌的形态与染色性示教297

7.8　新型隐球菌的分离与鉴定298

7.9　曲霉菌的检查法298

参考文献299

8　病毒学300

8.1　病毒形态电镜照片及包涵体示教300

8.2　病毒的培养方法301

8.2.1　动物实验法301

8.2.2　鸡胚培养法302

8.2.3　病毒的组织细胞培养法303

8.3　病毒的定量检测法304

8.3.1　 50％组织细胞感染量试验304

8.3.2　 空（蚀）斑形成试验305

8.4　中和试验306

8.5　肠道病毒的分离与鉴定308

8.6　流感病毒的血凝及血凝抑制试验309

8.7 HIV感染的微生物学检查312

8.7.1 HIV的分离与鉴定试验312

8.7.2 HIV抗体的检测试验312

8.8.3 反向间接血凝试验314

8.8.2 对流免疫电泳314

8.8.1 琼脂双向扩散试验314

8.8 HbSAg检测试验314

8.8.4 固相酶联免疫吸附试验315

8.9 HBV的核酸检测试验315

8.10 HCV抗体的检测试验316

参考文献317

9 人体寄生虫学实验技术318

9.1 病原学检查318

9.1.1 粪便检查318

9.1.2 血液检查326

9.1.3 排泄物与分泌物等的检查329

9.1.4 其他器官组织检查330

9.1.5 寄生虫的人工培养331

9.1.6 寄生虫的动物模型335

9.1.7 动物接种336

9.2 免疫学检查337

9.2.1 皮内试验337

9.2.2 环卵沉淀试验337

9.2.3 尾蚴膜反应338

9.2.4 免疫荧光法338

9.2.5 酶标抗原对流免疫电泳339

9.2.6 间接血凝试验340

9.2.7 酶联免疫吸附试验340

9.2.8 免疫酶染色试验342

9.2.9 酶免疫转印技术343

9.2.10 DNA探针技术344

9.2.11 聚合酶链反应344

9.3 人体寄生虫形态学347

9.3.1 似蚓蛔线虫（蛔虫）347

9.3.2 蠕形住肠线虫（蛲虫）349

9.3.3 钩虫349

9.3.4 丝虫350

9.3.5　毛首鞭形线虫（鞭虫）351

9.3.6　旋毛形线虫（旋毛虫）352

9.3.7　猪巨吻棘头虫352

9.3.8　链状带绦虫（猪肉绦虫、有钩绦虫、猪带绦虫）353

9.3.9　肥胖带绦虫（牛带绦虫、牛肉绦虫、无钩绦虫）354

9.3.10　细粒棘球绦虫（包虫）355

9.3.11　微小膜壳绦虫355

9.3.12　曼氏迭宫绦虫356

9.3.13　华支睾吸虫（肝吸虫）356

9.3.14　布氏姜片吸虫（姜片虫）357

9.3.15　卫氏并殖吸虫（肺吸虫）358

9.3.16　日本裂体吸虫（日本血吸虫）358

9.3.17　引起皮炎的血吸虫尾蚴360

9.3.18　溶组织内阿米巴（痢疾阿米巴）360

9.3.19　结肠内阿米巴（结肠阿米巴）361

9.3.21　阴道毛滴虫（阴道滴虫）362

9.3.20　杜氏利什曼原虫362

9.3.23　疟原虫363

9.3.22　蓝氏贾第鞭毛虫363

9.3.24　刚地弓形虫（弓形虫）365

9.3.25　蜱365

9.3.26　螨366

9.3.27　蚊366

9.3.28　蝇368

9.3.29　白蛉368

9.3.30　蚤368

9.3.32　蜚蠊369

参考文献369

9.3.31　虱369

10　疫苗研究技术370

10.1　疫苗研究的种类370

10.1.1　基因工程疫苗370

10.1.2　肽疫苗375

10.1.3　抗独特型抗体疫苗377

10.2　疫苗的应用378

10.2.1　肿瘤疫苗378

10.2.2　感染性疾病疫苗381

10.2.3　食用疫苗383

10.3　疫苗研究存在的问题385

参考文献385