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1 昆虫细胞培养1

1．1 昆虫细胞培养的基础知识2

1．1．1 细胞培养的一些基本概念2

1．1．2 细胞的形态4

1．1．3 细胞生长和增殖过程及其特点6

1．2 昆虫细胞培养基与平衡盐溶液10

1．2．1 平衡盐溶液10

1．2．2 培养基11

1．3 昆虫细胞培养基本技术29

1．3．1 基本操作技术29

1．3．2 原代培养32

1．3．3 传代培养35

1．3．4 细胞的冻存与复苏38

1．3．5 影响昆虫细胞增殖的环境因素40

1．4 昆虫细胞培养常规研究方法42

1．4．1 细胞形态观察42

1．4．2 细胞生长的动力学研究43

1．4．3 细胞活力测定45

1．4．4 细胞的克隆46

1．4．5 细胞染色体分析48

1．4．6 细胞的同工酶测定50

1．4．7 DNA分子标记技术53

1．5 常用的昆虫细胞系及其特性56

1．5．1 昆虫细胞系的命名56

1．5．2 常用的昆虫细胞系及其特性58

1．5．3 我国建立的昆虫细胞系61

主要参考文献64

2 昆虫细胞系的生理与发育能力70

2．1 细胞的内分泌70

2．1．1 蜕皮甾类激素的合成和代谢70

2．1．2 蜕皮甾类激素的作用72

2．2 形态发生79

2．2．1 形态的调节79

2．2．2 发育因子来源的细胞系82

主要参考文献82

3 昆虫神经细胞的离体培养及其应用86

3．1 昆虫神经细胞培养86

3．1．1 昆虫神经细胞培养方法87

3．1．2 离体培养神经细胞的类型和细胞形态87

3．2 神经细胞的生理学90

3．2．1 昆虫器官培养——脑与神经分泌90

3．2．2 离子通道与离子电流93

3．3 神经系统发育生物学97

3．3．1 神经的发生与分化97

3．3．2 神经递质表型的发育99

3．3．3 突触的发生100

3．3．4 轴突生长101

3．3．5 神经胶质细胞的培养与作用102

3．4 神经细胞受体的药理学104

3．5 神经细胞与靶细胞的共培养及其相互作用106

主要参考文献108

4 离体昆虫细胞对胁迫因子的抗性114

4．1 昆虫细胞对X射线和γ射线的抗性115

4．1．1 昆虫细胞的相对抗性115

4．1．2 DNA的修复116

4．1．3 细胞的恢复及其过程121

4．2 昆虫细胞对紫外线的抗性126

4．2．1 昆虫细胞的相对抗性126

4．2．2 DNA的修复127

4．2．3 细胞的恢复及其过程128

4．3 昆虫细胞对化学因子的抗性129

4．3．1 昆虫细胞的相对抗性129

4．3．2 DNA的修复130

4．3．3 细胞的恢复及其过程130

4．4 昆虫细胞对热的抗性131

4．4．1 昆虫细胞的相对抗性131

4．4．2 细胞恢复过程132

4．4．3 分子恢复过程133

4．5 胁迫敏感突变体细胞134

4．5．1 突变体细胞的分离134

4．5．2 胁迫敏感突变体细胞的特性134

主要参考文献135

5 杆状病毒表达载体介导外源基因在昆虫细胞中的表达138

5．1 杆状病毒及其基因组138

5．1．1 杆状病毒的分类及其生物学特征138

5．1．2 杆状病毒的基因组及基因141

5．1．3 杆状病毒基因表达143

5．2 杆状病毒表达载体系统145

5．2．1 杆状病毒表达载体的特性145

5．2．2 重组杆状病毒的构建原理146

5．2．3 转移栽体147

5．2．4 插入重组杆状病毒中的外源基因148

5．2．5 用于驱动外源基因表达的启动子148

5．3 重组杆状病毒的构建方法149

5．3．1 转移栽体的构建149

5．3．2 转移栽体与病毒共转染152

5．3．3 重组病毒的分离、筛选与鉴定155

5．4 杆状病毒表达载体的应用156

5．4．1 外源蛋白的高效袁达156

5．4．2 基于杆状病毒表达栽体的重组病毒杀虫剂160

5．4．3 基于杆状病毒载体的基因治疗166

主要参考文献172

6 从昆虫细胞诱导抗菌肽176

6．1 抗菌肽及其类型177

6．1．1 天蚕素类177

6．1．2 昆虫防御素178

6．1．3 富含脯氨酸的抗茵肽178

6．1．4 富含甘氨酸的抗茵肽179

6．2 抗菌肽的功能及作用方式179

6．2．1 抗茵肽的功能179

6．2．2 抗茵肽作用机制185

6．3 抗菌肽的基因及其表达191

6．3．1 抗茵肽的基因和基因组织192

6．3．2 抗茵肽基因的表达与调控196

6．4 利用昆虫离体细胞诱导抗菌肽200

6．4．1 昆虫细胞与表达抗茵肽200

6．4．2 昆虫细胞抗茵肽诱导和分离205

主要参考文献210

7 昆虫细胞在病毒研究中的应用216

7．1 昆虫细胞对病毒的敏感性216

7．2 病毒的离体复制219

7．2．1 核型多角体病毒的离体复制219

7．2．2 颗粒体病毒的离体复制225

7．2．3 质型多角体病毒的离体复制230

7．2．4 其他病毒的离体复制233

7．3 病毒基因的表达与调控237

7．3．1 杆状病毒基因的表达237

7．3．2 杆状病毒基因表达的细胞因子240

7．4 病毒与宿主细胞的相互关系研究244

7．4．1 病毒诱导细胞凋亡244

7．4．2 病毒复制与细胞周期256

7．4．3 病毒复制与细胞骨架259

主要参考文献265

8 昆虫细胞大规模培养及其应用271

8．1 昆虫细胞和表达载体的选择271

8．2 昆虫细胞代谢276

8．3 昆虫细胞大规模培养方法与大规模培养279

8．3．1 滚瓶培养279

8．3．2 昆虫细胞的微载体及其他固定化培养280

8．3．3 转瓶培养284

8．3．4 摇瓶培养287

8．3．5 生物反应器培养288

8．3．6 影响昆虫细胞增殖的理化因素297

8．4 昆虫细胞大规模培养的应用307

8．4．1 外源蛋白的生产307

8．4．2 病毒的生产316

主要参考文献319

9 昆虫细胞在苏云金杆菌毒素研究中的应用326

9．1 苏云金杆菌毒素326

9．1．1 苏云金杆菌毒素及其性质326

9．1．2 昆虫细胞对苏云金杆茵毒素的敏感性330

9．2 苏云金杆菌毒素的细胞病理研究335

9．2．1 鳞翅目昆虫细胞336

9．2．2 双翅目昆虫细胞339

9．3 苏云金杆菌毒素作用机制341

9．4 利用昆虫细胞研究苏云金杆菌抗性349

9．4．1 昆虫对苏云金杆菌的抗性349

9．4．2 抗性细胞的建立和筛选350

9．4．3 抗性成因和机制355

9．5 基于昆虫细胞的苏云金杆菌毒素测定技术364

9．5．1 草坪测定364

9．5．2 Bt杀虫剂的离体细胞生物测定366

主要参考文献369