图书介绍
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- 吴建祥，李桂新主编；谢艳，钱亚娟，刘小红副主编 著
- 出版社： 杭州：浙江大学出版社
- ISBN：9787308122849
- 出版时间：2014
- 标注页数：118页
- 文件大小：23MB
- 文件页数：132页
- 主题词：分子生物学－实验
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图书目录
第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定1
第一节 概述1
第二节 碱法提纯质粒DNA4
一、设备4
二、材料5
三、试剂5
四、操作步骤6
五、注意事项6
第三节 Axygen质粒提取试剂盒提纯质粒DNA7
一、设备7
二、材料7
三、试剂7
四、操作步骤7
五、注意事项8
第四节 离心机的使用及注意事项8
一、离心机的使用步骤8
二、离心机使用的注意事项8
第二章 DNA琼脂糖凝胶电泳和RNA甲醛琼脂糖凝胶变性电泳9
第一节 概述9
第二节 DNA的琼脂糖凝胶11
一、设备11
二、材料11
三、试剂11
四、操作步骤11
五、注意事项12
第三节 RNA甲醛琼脂糖凝胶变性电泳12
一、设备13
二、材料13
三、试剂13
四、操作步骤13
五、注意事项13
第三章 质粒DNA的限制性酶切鉴定、割胶回收与纯化14
第一节 概述14
第二节 设备、材料及试剂15
一、设备15
二、材料15
三、试剂16
第三节 操作步骤16
一、酶切反应16
二、酶切产物的电泳分离和鉴定16
三、酶切产物的割胶回收16
四、注意事项17
第四章 特异片段与载体的连接反应19
第一节 概述19
一、带有非互补粘性末端DNA片段的连接20
二、带有相同粘性末端DNA片段的连接20
三、带有平末端DNA片段的连接20
四、适当改造的DNA片段的连接20
五、PCR介导的DNA片段的连接20
第二节 设备、材料及试剂22
一、设备22
二、材料22
三、试剂22
第三节 操作步骤22
一、外源片段和pMD18-T载体的连接反应（10μl体系）22
二、外源片段和质粒载体的连接反应（10μl体系）22
三、注意事项23
第五章 大肠杆菌感受态细胞的制备及连接产物的转化、鉴定24
第一节 概述24
一、大肠杆菌感受态细胞的制备24
二、影响细菌转化效率的因素25
三、转化子的鉴定25
第二节 设备、材料及试剂26
一、设备26
二、材料26
三、试剂26
第三节 操作步骤26
一、感受态细胞的制备26
二、连接产物的转化27
三、转化子的鉴定28
第六章 PCR扩增技术30
第一节 概述30
一、PCR技术的基本原理30
二、参与PCR反应体系的因素及其作用30
三、PCR反应参数32
第二节 设备、材料及试剂34
一、设备34
二、材料34
三、试剂34
第三节 操作步骤34
一、常规PCR反应34
二、菌落PCR35
三、电泳35
四、PCR产物的纯化35
五、注意事项36
第七章 基因组DNA的提取37
第一节 概述37
第二节 从植物组织提取基因组DNA37
一、设备37
二、材料38
三、试剂38
四、操作步骤38
五、注意事项39
第三节 从动物组织提取基因组DNA40
一、设备40
二、材料40
三、试剂40
四、操作步骤40
第四节 细菌基因组DNA的制备40
一、设备40
二、材料41
三、试剂41
四、操作步骤41
第五节 真菌基因组DNA提取41
一、设备41
二、材料41
三、试剂41
四、操作步骤42
第六节 基因组DNA的纯度鉴定42
第八章 动植物总RNA的提取43
第一节 概述43
第二节 设备、材料及试剂44
一、设备44
二、材料44
三、试剂44
第三节 实验操作44
一、Trizol法提取动植物总RNA的基本步骤44
二、注意事项44
三、如何处理RNA中的DNA45
四、RNA纯度鉴定45
第九章 RT-PCR技术46
第一节 概述46
第二节 两步法RT-PCR47
一、设备47
二、材料47
三、试剂47
四、操作步骤47
五、注意事项48
第十章 蛋白质的SDS-PAGE电泳及WesterNblot分析49
第一节 概述49
第二节 设备、材料及试剂50
一、设备50
二、材料50
三、试剂50
第三节 操作步骤52
一、蛋白的SDS-PAGE52
二、WesterNblot技术53
三、快速银染检测SDS-PAGE胶中蛋白57
第十一章 核酸分子杂交技术58
第一节 核酸探针标记的方法58
一、双链DNA探针及其标记方法58
二、单链DNA探针60
三、末端标记DNA探针63
四、寡核苷酸探针64
五、RNA探针64
第二节 几种常见的核酸杂交66
一、SoutherNblot66
二、NortherNblot70
三、Small RNA（小RNA） NortherNblot杂交72
四、地高辛标记的SoutherNblot杂交74
第三节 杂交反应的条件及参数的优化76
第十二章 RFLP和RAPD技术77
第一节 概述77
第二节 RFLP技术78
一、设备78
二、材料78
三、试剂78
四、操作步骤78
第三节 RAPD技术79
一、设备79
二、材料79
三、试剂79
四、操作步骤80
五、注意事项80
第十三章 蛋白的原核表达技术81
第一节 概述81
第二节 基因的诱导表达及表达产物的分析86
一、设备86
二、材料86
三、试剂86
四、操作步骤86
五、注意事项87
第三节 6× His融合蛋白的大量表达及8M尿素变性条件下用镍离子纯化蛋白87
一、设备87
二、材料87
三、试剂87
四、操作步骤88
五、注意事项88
第四节 镍离子在自然条件下纯化6× His融合蛋白89
一、设备89
二、材料89
三、试剂89
四、操作步骤89
五、注意事项90
第五节 GST融合蛋白的表达及其亲和层析纯化90
一、设备90
二、材料90
三、试剂90
四、操作步骤90
第六节 MBP融合蛋白的表达及其亲和层析纯化91
一、设备91
二、材料91
三、试剂91
四、操作步骤91
第十四章 酶联免疫吸附试验93
第一节 概述93
第二节 设备、材料及试剂97
一、设备97
二、材料97
三、试剂97
第三节 操作步骤98
一、直接ELISA步骤98
二、间接ELISA检测抗青霉素抗体效价或青霉素抗体99
三、抗原包被ELISA（ACP-ELISA）检测南方水稻黑条矮缩病毒（SRBSDV）的步骤99
四、DAS-ELISA测乙肝病毒步骤100
五、TAS-ELISA的步骤100
六、酶标记抗原竞争ELISA测三聚氰胺的步骤100
七、酶标记抗体竞争ELISA测青霉素101
八、酶标记二抗竞争ELISA测氯霉素101
九、dot-ELISA检测水稻中南方水稻黑条矮缩病毒（SRBSDV）的步骤101
十、dot-ELISA检测灰飞虱中水稻黑条矮缩病毒（RBSDV）的步骤102
附录104
附录1 细菌、酵母及核酸的贮存104
一、细菌保存104
二、酵母贮存104
三、DNA贮存105
四、RNA贮存105
附录2 常用试剂、溶液及缓冲液的配制105
一、基本要求105
二、浓酸和浓碱的浓度106
三、常用贮液与溶液106
四、电泳缓冲液、染料和凝胶加样液112
附录3 常用培养基和抗生素的配制115
一、一般要求115
二、常用培养基116
三、常用抗生素117
参考文献118