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第一章 电子显微镜学1

1-1　电子显微镜学的历史与目的1

绪言1

历史5

1-2　穿透式电子显微镜的构造与利用7

构造7

解像力与波长7

1-3　扫描式电子显微镜的构造与到用13

穿透式电子显微镜16

1-4　电子显微镜学样品的制备16

扫描式电子显微镜17

第二章 穿透式电子显微镜的化学固定法19

2-1　绪言19

化学固定的目的与影响19

化学固定的一般反应20

2-2　影响化学固定的因子21

缓冲液和酸碱度21

张力22

时间长短24

温度24

电解质与非电解质24

样品大小25

清洗25

2-3　固定步骤25

一般评论25

原处固定法27

灌流固定法28

2-4　化学固定剂的种类29

绪言29

一般固定步骤29

四氧化锇30

与脂质的作用30

与蛋白质的作用33

与碳水化合物的作用33

反应摘要34

四氧化锇的使用34

与四氧化锇合用的缓冲液配方36

（1）Palade（1952）醋酸佛罗那缓冲锇37

（2）Dalton（1955）铬一锇固定剂（1％）39

（3）Millonig（1961b）磷酸缓冲锇（1％）40

（4）Sorensen氏之磷酸缓冲液（Mc Clean及Cook,1952）及锇（1％）41

（5）Kellenberger等氏（1958）醋酸佛罗那缓冲之锇（1％）43

四氧化钌44

醛类之介绍44

戊二醛（戊二酸二醛）45

与蛋白质的作用46

与其他细胞成分的作用47

戊二醛的操作47

丙烯醛49

甲醛（福马林，甲酸—醛）50

（1）Pease（1964）磷酸缓冲之甲醛（10％）52

醛类之缓冲液配方52

醛类摘要52

（2）Sabatini等氏（1962），二甲次砷酸缓冲之戊二醛（5％）53

（3）Holt及Hicks(1961b),S—胶吡啶缓冲之戊二醛（5％）55

（4）Millonig（1961b），磷酸缓冲之戊二醛（10％）60

（5）Gibbs（1962），海产固定剂，醋酸佛罗那缓冲之戊二醛（5％）61

（6）Ramuss（1969），二甲次砷酸盐-蔗糖缓冲之戊二醛（5％）62

（7）Luft（1959），二甲次砷酸盐缓冲之丙烯醛（5％）63

（8）Karnovsky（1965），二甲次砷酸盐缓冲之戊二醛-甲醛（各3％）64

（9）Dawes（1969b），磷酸缓冲之戊二醛-丙烯醛（各3％）65

高锰酸（MnO4）66

（10）Hirsh及Fidorko（1968）同时固定（戊二醛及四氧化锇）66

高锰酸盐之操作67

高锰酸盐用缓冲液配方68

（1）Luft（1956），醋酸佛罗那缓冲之高锰酸盐（0.6％）68

（2）Mollenhauer（1959），未缓冲之高锰酸盐（5％）。69

（3）Dawes及Rhamstine（1967），醋酸佛罗那盐缓冲之高锰酸盐（0.6％）69

（4）Dawes及Rhamstine（1967），海水缓冲之高锰酸盐（0.6％）70

第三章 穿透式电子显微镜包埋材料之制备71

3-1　组织操作71

3-2　清洗71

3-3　脱水72

3-4　以水溶性塑胶作脱水剂74

3-5　脱水步骤75

乙醇-环氧丙烷或丙酮-缓慢步骤76

乙醇-环氧丙烷或丙酮-迅速步骤77

丙酮脱水77

无限稀释77

第四章　包埋79

4-1　绪言79

4-2　塑胶之处理80

4-3　渗透81

4-4　胶囊包埋82

4-5　平式包埋86

4-6　颗粒样品包埋（预包埋）87

洋菜预包埋88

牛蛋白素预包埋90

组织培养之三明治式包埋90

易碎样品之包埋90

第五章　塑胶93

5-1　绪言93

5-2　甲基丙烯酸酯类（丙烯树酯类）94

一般资料96

塑胶混合物及包埋96

5-3　聚酯树脂（羟基醇类）98

聚酯树脂配方99

（1）Vestopal W（Ryter及Kellenberger,1958）99

（2）Rigolac(Kushida,1960)100

5-4　环氧树脂（环氧乙烷塑胶类）101

环氧树脂类之化学101

（1）Epon及Araldite树脂102

（2）ERL-4206103

硬化剂的化学104

（1）十二烯基丁二酐（DDSA）104

（3）其他的环氧树脂104

（2）Nadic methyl anhydride(NMA)105

（3）Nonenyl succinic anhydride(NSA)105

塑化剂的化学105

（1）二丁基苯二甲酯105

加速剂的化学（催化剂）106

（1）苯二甲胺（BDMA）106

（2）DER 736106

（2）2,4,6 Tris(dimethyl aminomethyl)phenol(DMP-30)107

（3）Dimethyl amino methyl phenol(DMP10)107

（4）二甲基氨基乙醇（DMAE,S-1）107

酸酐-环氧系统之硬化机制108

环氧塑胶的去除109

环氧树脂配方（非水溶性）110

（1）Glauert及Glauert氏之英国Araldite(1958)110

（2）Luft氏之美国Araldite(1961)111

（3）Coulter（1967）氏之Luft氏Araldite之改良111

（5）Cargille氏之美国Araldite(1962)112

（4）Fineran及Bullock（1972）氏之Luft氏Aral-dite之改良112

（6）Luft氏之Epon(1961)113

（7）Coulter氏（1967）：Luft氏Epon之改良115

（8）Spurr氏（1969）之低粘度包埋介质115

（9）Mollenhauer氏之Epon-Araldite混合物（1963）116

（10）Freeman及Spurlock氏之Maraglas混合物（1962）117

5-5　水溶性塑胶之包埋119

Durcupan119

（1）Stabbi氏（1960）之纯Durcunan119

（2）Kushida氏（1964）之组合性Durcupan120

（3）Staubi氏（1963）之Durcupan-Araldite步骤121

甲基丙烯酸乙二酯（GMA）121

（1）Leduc及Bernhard氏（1967）之甲基丙烯酸乙二酯122

第六章　样品块之修整与切片刀125

6-1　样品块之修整125

初步修整125

最後修整126

6-2　切片刀127

金属刀129

钻石刀129

钻石刀的使用131

钻石刀的清洁132

玻璃刀133

玻璃刀的制作原理133

玻璃刀的制作135

第七章 切片及超薄切片机141

7-1　原理之考虑141

7-2　超薄切片之劈裂理论142

7-3　切片历史之大要144

7-4　超薄切片机145

7-5　切片148

7-6　切片的处理152

7-7　困难的补救155

第八章 染色（增强对比度）157

8-1　绪言157

8-3　染色步骤162

组织块染色166

切片染色167

铅染色169

铅化合物的反应171

铅染色的步骤172

（2）柠檬酸铅（Venable及Coggeshall,1965）173

（1）氢氧化铅的柠檬酸盐钳合物（Reynolds,1963）173

（3）高浓度的柠檬酸铅174

（4）氢氧化铅的酒石酸钳合物（Millonig,1961a）174

（5）氢氧化铅的环醋酸钳合物（Dalton及Zeigel,1958）175

（6）氢氧化铅的钳合物（Dalton及Zeigel,1960）175

（7）氢氧化铅（Karnovsky,1961）176

（8）氢氧化铅（Watson,1958b）176

（9）氢氧化铅（Converse，私人联系）177

铀氧基染剂177

铀氧基染剂的反应178

铀氧基染色步骤179

（1）组织块染色，醋酸双氧铀（Terzakis,1968）179

（2）切片染色，醋酸双氧铀（Watson,1958a）180

（3）切片染色，硝酸双氧铀（Zobel及Beer,1961）180

（4）双重染色180

磷钨酸染剂181

PTA的反应182

（1）使用PTA的酒精溶液作组织块染色182

（3）PTA-铬酸（Roland等氏，1972）183

（2）使用PTA的酒精溶液作切片染色183

高锰酸盐染剂184

（1）切片染色184

（2）组织块染色184

（3）三重染色（Soloff,1973）184

锇染剂185

（1）四氧化锇185

（2）四氧化锇-碘化锌（Maillet,1968）185

（4）锇-对苯二胺（Ledingham及Simpson,1972）186

（3）与锇结合之染剂（Seligman等氏，1968）186

（5）丙烯酸-四氧化锇（Herbert等氏，1972）187

（6）OTO方法（Hanker等氏，1966;Seli-gman等氏，1966）187

银染剂189

（1）高碘酸-银染色法（Martino及Zamboni,1967）190

（2）高碘酸-铬酸-银染色法（Mowry,1959）191

铁191

（1）胶质的甘油铁胺（Rinehart及Abul-Haj,1951）192

钍193

（1）组织块染色（Ramboug及LeBlond,1967）193

铋194

（1）组织块染色194

（2）切片染色（Revel,1964）194

（2）特殊切片染色195

（3）一般目的之切片染色196

铟196

（1）三氯化铟及阻碍反应（Watson及Aldridge,1961,1963）196

（2）非特殊性铟染剂（Sheffield,1964）197

钒198

（1）硫酸钒198

（2）钼酸钒198

镧198

（1）钉红-四氧化锇（Siew及Wagner,1968）199

钌红199

（2）钌红-细胞外染色（Brooks,1969）200

在放射活性基上金或银的沈淀200

第九章　碳及金属覆膜、铸模及颗粒样品203

9-1　高真空蒸著机203

抽气系统203

钟罩与底盘204

控制器204

计量器204

9-3　金属投影207

9-2　碳的蒸著207

9-4　扫描式电子显微镜用之覆膜210

9-5　铸模211

Henderson（1969）的纤维素-醋酸铸模技术214

Wardrop（1974）的湿铸技术215

9-6　颗粒性样品219

碎断219

移置220

整体移置的投影法223

整体移置的负染色法224

（1）以牛血清为底基的磷钨酸染剂225

（2）以淀粉为底基的磷钨酸染剂226

（3）以蔗糖为底基的磷钨酸染剂226

（4）醋酸双氧铀染剂226

（5）蚀刻後环氧树脂切片的负染色226

第十章　厚切片及筛片制备227

10-1　厚切片染色227

（1）甲苯胺蓝228

（2）四甲基蓝—蔚蓝Ⅱ228

（4）结晶紫229

（5）多重染色法（Van Reempts及Brogers,1975）229

（3）碱性品红229

10-2　样品筛片的种类230

10-3　筛片清理231

10-4　塑胶支持膜232

方法Ⅰ．在玻璃上成型235

方法Ⅱ．在水面成型235

方法Ⅲ．在水面成型236

多孔塑胶膜的制备238

方法Ⅰ．塑胶上之碳膜239

10-5　碳支持膜239

方法Ⅱ．云母上之碳膜240

方法Ⅲ．玻璃上之碳膜240

方法Ⅳ．化学方法分裂之石墨膜241

第十一章　样品制备的物理技术243

11-1　绪言243

11-2　低温技术243

冷冻、取代、防冻244

冷冻取代245

冷冻乾燥249

冷冻刻裂与蚀刻251

原理256

11-3　临界点乾燥256

步骤258

第十二章　扫描式电子显微镜学的制备技术263

12-1　绪言263

12-2　加速电压的选择264

乾燥、坚固的样品265

细致的组织：脱水及乾燥265

导论265

12-3　扫描式电子显微镜生物样品的制备265

细致的组织：冷冻乾燥267

细致的组织：临界点乾燥269

未固定，未覆膜的新鲜或冷冻组织270

部分包埋272

刻裂及蚀刻273

染色274

第十三章　摄影学275

13-1　绪言275

13-2　摄影的化学275

曝光276

对比276

13-3　电子记录的理论276

片速与粒性278

解像力与散布函数280

电子检出（DQE）280

电子显微像理论及应用281

13-4　放大率与解像力的决定282

13-5　一般暗房程序282

13-6　负片显影283

软片的显影284

版片或单张片的显影285

13-7　印相片及放大286

13-8　穿透式电子显微镜学用之软片294

幻灯机幻灯版片295

柯达电子影像版片295

柯达电子影像软片（4463）296

杜邦可乐娜单张软片297

柯达微粒正片（35mm）297

一般的相纸及处理机297

13-9　扫描式电子显微镜之摄影学298

参考文献301

Ⅰ－3　一般供应品公司323

Ⅰ－2　扫描式电子显微镜323

附录Ⅰ．商品来源323

Ⅰ－1　穿透式电子显微镜323

Ⅰ－4　钻石刀324

Ⅰ－5　玻璃刀制作器324

Ⅰ－6　超薄切片机325

Ⅰ－7　样品筛片325

Ⅰ－8　四氧化锇及其他特殊药剂325

Ⅰ－9　喷覆覆膜机及高真空蒸著机的附件325

Ⅰ－11　临界点乾燥器326

Ⅰ－12　冷冻刻裂及冷冻乾燥装置326

Ⅰ－10　高真空蒸著机326

附录Ⅱ．样品制备程序327

Ⅱ－1　穿透式电子显微镜学327

固定327

脱水328

包埋328

样品块修整及筛片制备329

切片及染色329

Ⅱ－2　扫描式电子显微镜学329

英中名词对照表331